李晋玉   徐林   谭荣伟   金合   李志勇   俞兴

    目的:本实验旨在观察中药骨碎补提取物骨碎补总黄酮（AFDR）复合海藻酸基可注射骨修复材料对成骨细胞MC3T3-E1体外培养的影响。

    方法:将成骨细胞株MC3T3-E1随机分为空白对照组、单纯使用海藻酸基可注射骨修复材料组、AFDR0.04mg/L、0.16mg/L、0.64mg/L、1.28mg/L、5.12mg/L 7组，体外复合海藻酸基可注射骨修复材料，以24h和48h为观察时间点，倒置显微镜观察MC3T3-E1细胞形态，台盼蓝拒染法检测MC3T3-E1存活率，MTT法观察细胞增殖效应，碱性磷酸酶(ALP) 活性和骨钙素定量检测分别观察不同浓度骨碎补总黄酮促进MC3T3-E1分化作用， 采用Von kossa 钙化染色法观察其促MC3T3-E1细胞钙化作用。

    结果:①倒置显微镜下观察复合海藻酸基可注射骨修复材料的MC3T3-E1细胞形态，细胞形态呈三角形、多边形、长梭形等，呈集落样生长，无接触抑制，有伪足伸出，胞液透亮，核圆形。AFDR各组不同程度促进成骨细胞的增殖、分化：7组能不同程度的促进成骨细胞的增殖、分化，与空白对照组比较，以0.16 mg/L和0.64mg/L剂量组的成骨细胞增殖数量最多，1.28mg/L，5.12mg/L的AFDR对细胞增殖作用不明显；②MC3T3-E1平均存活率≥90%；③骨碎补总黄酮（AFDR）0.16 mg/L和0.64mg/L剂量组在培养24小时和48小时，其OD值与空白对照组及组间均有显著性差异，可促进MC3T3-E1细胞增殖（P< 0.05和P<0.01）；④AFDR 0.16 mg/L和0.64mg/L剂量组能使MC3T3-E1的 ALP 活性升高(P<0.05)；⑤ AFDR 0.64mg/L剂量组能促进MC3T3-E1骨钙素合成( P<0.05)；⑥AFDR 0.16 mg/L和0.64mg/L剂量组均可促进细胞钙化(P< 0.05)。

    结论:AFDR可显著促进在海藻酸基可注射骨修复材料上MC3T3-E1的增殖、分化和钙化，其作用具有时间依赖和剂量依赖关系。