兔骨髓间充质干细胞通过抑制NF-kB途径延缓髓核细胞退变

2014-04-10   文章来源:苏州大学附属第一医院骨科 杨惠林 邹俊 曹成    点击量:1262 我要说

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【摘要】目的:探讨兔骨髓间充质干细胞(bonemarrow-derived mesenchymal stem cells,BMSCs延缓髓核细胞(nucleuspulposus cellsNPCs)退变的机制。

 方法:取1月龄新西兰大白兔的髓核及双侧股骨和胫骨处骨髓进行NPCsBMSCs的分离、培养及鉴定,实验分为三个培养组:单纯NPCs培养组,单纯BMSCs培养组,NPCsBMSCs(l:1)共培养组。在培养的第3d5d7d9dCCK8法测定三组细胞增殖情况。在培养的不同时间点(5d8dlld14d)RT-PCR (reverse transcriptase-polymerase chain reaction) 检测三组蛋白聚糖、II 型胶原、SOX-9 mRNA 的表达变化;ELISA法检测三组TGF-β1的含量变化;Western-blot法检测三组NF-kB的含量变化;并以免疫细胞化学染色鉴定三组细胞各时间点II型胶原的表达。

 结果:成功分离培养兔BMSCsNPCsBMSCs鉴定呈CD29+CD90+CD34-。第3d起共培养组细胞增殖能力高于其他两组,且随培养时间的延长而增加。第lld起共培养组中SOX-9表达高于其余两组;第14d起共培养组中的蛋白聚糖及II型胶原的表达高于其余两组。第lld起共培养组TGF-β1含量较其余两组增高,而NF-kB的含量较另外两组降低。

 结论BMSCsNPCs共培养后能促进NPCs蛋白聚糖、II型胶原、SOX-9的表达,延缓NPCs的退变,其机制主要是BMSCs通过上调TGF-β1从而抑制NF-kB途径而实现的。


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