康健   侯洋  周许辉  杨立利  陈华江  唐先业  袁文

目的: 明确兔骨髓间充质干细胞的分化能力及分化条件，以TGF-β₃和BMP-7诱导兔骨髓间充质干细胞向类髓核细胞分化，为组织工程髓核的构建提供良好的种子细胞。

方法: 利用全骨髓贴壁法分离获取兔骨髓间充质干细胞，并对细胞进行培养和传代，以特定的环境及细胞诱导液进行诱导，促使其向特定的中胚层细胞分化。再将细胞分为四组，A ：空白对照组，B：BMP-7诱导组，C：TGF-β3诱导组，D：TGF-β₃与BMP-7共同诱导组，诱导21天后对蛋白聚糖、Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原、Ⅹ型胶原和SOX9基因进行realtime-PCR检测。

 结果: 全骨髓贴壁法分离获得的原代兔骨髓间充质干细胞生长良好，2周后显微镜下观察细胞间形态较为一致，成纺锤形。细胞传代后生长良好。细胞表面表达CD29、CD105、CD166表面标记物。在成骨诱导培养液、成软骨诱导培养液和脂肪诱导培养液的诱导下，培养21天后，通过特定染色发现兔骨髓间充质干细胞向预定方向分化生长。以TGF-β₃和BMP-7生长因子诱导21天后，蛋白聚糖、Ⅱ型胶原和SOX9基因表达C组和D组明显高于A组和B组（P<0.05），X型胶原表达A组和B组明显高于C组和D组（P<0.05），Ⅰ型胶原表达四组之间无明显差异。

 结论: 全骨髓贴壁法可以成功分离获得状态良好的兔骨髓间充质干细胞，在成骨诱导培养液、成软骨诱导培养液和脂肪诱导培养液的诱导下，兔骨髓间充质干细胞可向预定的方向分化且生长良好。TGF-β₃和BMP-7诱导兔骨髓间充质干细胞后可明显提高其类髓核细胞具有的下游基因表达水平。