陈松^△   符培亮^△   丛锐军   吴海山   许震宇(△共同第一作者)

    目的: 探讨TGF-β3、BMP-2及地塞米松（dexamethasone，DEX）诱导兔滑膜MSCs（synovial MSCs，SMSCs）成软骨分化的作用。

    方法: 取5只10～16月龄新西兰大白兔（体重1.8～2.5 kg）膝关节滑膜分离培养SMSCs，并行形态学观察、流式细胞仪检测细胞表面抗原及成脂、成骨诱导分化鉴定。采用PELLET培养系统，将聚丙烯管中的SMSCs团块分成8组，分别加入不同组合的细胞因子进行成软骨诱导培养。A组TGF-β3，B组BMP-2，C组DEX，D组TGF-β3 + BMP-2，E组TGF-β3 + DEX，F组BMP-2 + DEX，G组TGF-β3 + BMP-2 + DEX，H组为对照组。通过比较各组软骨微球的直径、重量，蛋白聚糖（甲苯胺蓝染色）、Ⅱ型胶原（免疫组织化学染色）表达，以及软骨标志基因表达水平[实时定量RT-PCR（real time quantitative PCR，RT-qPCR）]来评价各组细胞因子诱导SMSCs成软骨能力大小，确定最佳成软骨诱导细胞因子组合；并通过检测各组软骨微球DNA含量来评价软骨微球重量增加与细胞增殖的关系。

    结果: 经鉴定，成功从新西兰大白兔膝关节处滑膜分离获得SMSCs。A～F组诱导产生的软骨微球直径较小、重量较轻，Ⅱ型胶原及蛋白聚糖合成量亦较低；而G组诱导产生的软骨微球直径最大，重量最重，蛋白聚糖及Ⅱ型胶原合成量亦最多，均显著高于A～F组（P < 0.05）；RT-qPCR结果显示，G组软骨相关基因（SOX-9、聚集蛋白聚糖、Ⅱ型胶原、Ⅹ 型胶原、BMP受体Ⅱ）的相对表达量显著高于其余各组（P < 0.01）。各组软骨微球DNA含量随时间延长不断降低（7 d降低约70%，14 d降低约80%，21 d降低约88%）。

    结论: SMSCs在TGF-β3、BMP-2及DEX三者联合诱导条件下成软骨分化能力最强；软骨微球重量的增加由细胞外基质合成增多导致，而不是由细胞增殖引 起。